| 人HIF-1α基因重组减毒沙门氏菌载体的构建及稳定性检测 |
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| 作者姓名： | 李戈 胡永浩 张尚弟 杨志华 哈小琴 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州730070;兰州军区兰州总医院检验科,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃兰州 730000
2. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州,730070
3. 兰州军区兰州总医院检验科,甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃兰州 730000 |
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| 基金项目： | 兰州军区后勤科研项目(CLZ11J09);兰州军区卫生项目(CLZ11JB04) |
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| 摘 要： | 利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其电转化入减毒沙门氏菌Ty21α中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPH;转染A549细胞,RT-PCR法检测HIF-1α基因表达,ELISA方法检测HIF-1α蛋白表达;TPH菌株在氨苄青霉素(+)和氨苄青霉素(-)LB培养板上分别传代40代,每10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定.结果表明:试验成功构建了携带HIF-1α基因的重组减毒沙门氏菌TPH,其可在体外细胞中稳定表达HIF-1α基因及蛋白,TPH可稳定遗传.
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| 关 键 词： | HIF-1α基因 减毒沙门氏菌 载体构建 稳定性 |
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