猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

用RT-PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因，并将其克隆到pMD18-T载体；经转化、筛选、鉴定后，测定了核苷酸序列，根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行gp55氨基酸序列推导，并进行同源性比较。结果表明，该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为81．9％、83．4％和83．5％；相应地，gp55氨基酸同源性分别为94．8％、95．6％和95．3％。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb后获得了重组质粒pFBHT-E2，进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，发生转座作用；经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA，将其命名为rBacmid-E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。