| 不同培养体系对猪胚胎多能样干细胞分离培养的影响 |
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| 引用本文： | 王宁,俞晓丽,刘晓鹏,马洋洋,成德,王华岩. 不同培养体系对猪胚胎多能样干细胞分离培养的影响[J]. 农业生物技术学报, 2016, 0(9): 1429-1438. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.09.017 |
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| 作者姓名： | 王宁 俞晓丽 刘晓鹏 马洋洋 成德 王华岩 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院,杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.31571521和No.31371505) |
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| 摘 要： | 为深入研究猪(Sus scrofa)胚胎干细胞(porcine embryonic stem cells,pESCs)分离培养自我更新和分化潜能,本研究利用不同培养条件,从孤雌胚胎(parthenogenetic embryos,PA)、细胞核移植胚胎(somatic cell nuclear transfer,SCNT)和体内受精胚胎(in vivo-produced,IVP)中分离pESC样细胞.对PA和SCNT胚胎的培养条件和关键多能基因进行检测,比较培养液中添加白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、糖原合成酶激酶3β抑制剂(inhibitors of glycogen synthase kinase 3β,CHIR99021)和有丝分裂原激活蛋白激酶l(mitogenactivated protein kinase 1,PD0325901)对分离pESCs的影响.结果显示,猪受精卵培养基3(porcine zygote medium 3,PMZ3)适合PA胚胎的发育,NCSU23培养基适合SCNT胚胎的发育.在PA和SCNT囊胚胎中,多能基因八聚体结合转录因子4 (octamer-binding transcription factor 4,OCT4)的表达量比提尔纳瑙伊(Tir na n-Og,NANOG)和性别决定区Y-box 2(sex determining region Y-box 2,SOX2)显著高;碱性成纤维细胞生长因子受体(basic fibroblast growth factor receptor,bFGFR)基因的表达显著上调,表明从PA和SCNT囊胚胎中分离pESCs需要同时添加bFGF.另外,通过添加bFGF,提高了从体内胚胎分离pESCs克隆的效率.细胞形态呈外胚层样干细胞,免疫荧光检测有NANOG和SOX2的表达,碱性磷酸酶检测阳性.本研究为分离pESCs提供了参考数据和方法.
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| 关 键 词： | 猪 孤雌胚胎(PA) 八聚体结合转录因子4(OCT4) 多能干细胞 分离培养 |
Isolation of Porcine (Sus scrofa) Pluripotent Stem Like Cells From Embryos in Different Culture Conditions |
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| Keywords: | Porcine Parthenogenetic embryos (PA) Octamer-binding transcription factor 4(OCT4) Pluripotent stem cell Isolate culture |
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