| 表面展示棉铃虫钙粘蛋白基因细胞系的建立 |
| |
| 引用本文： | 颜晓,苏蕊,郑桂玲,梁革梅,张杰,万方浩,李长友.表面展示棉铃虫钙粘蛋白基因细胞系的建立[J].农业生物技术学报,2016(5):755-763. |
| |
| 作者姓名： | 颜晓 苏蕊 郑桂玲 梁革梅 张杰 万方浩 李长友 |
| |
| 作者单位： | 1. 青岛农业大学农学与植物保护学院/山东省植物病虫害综合防控重点实验室,青岛,266109;2. 中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;3. 青岛农业大学农学与植物保护学院/山东省植物病虫害综合防控重点实验室,青岛266109;中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100094 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.31272376)、植物病虫害生物学国家重点实验室开放基金(No.SKLOF201315)和山东省“泰山学者”建设工程专项 |
| |
| 摘 要： | 为研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis杀虫晶体蛋白与其受体钙粘蛋白的相互作用,本研究利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)囊膜蛋白GP64细胞膜锚定的特点,将172 bp的N端信号肽(GP64 signal peptide,gp64sp)和135 bp的C端膜锚定区域(GP64 C-terminal transmembrane domain,gp64ctd)连接,并在中间添加了一段含有6个酶切位点的序列,再连接到表达载体pIZ/V5-His,成功构建了一个使外源基因在细胞膜上表达的重组载体pIZ/V5-gp64.将扩增的3 882 bp的棉铃虫钙粘蛋白(Helicoverpa armigera cadherin,HaCAD)基因重复区和近膜区片段与重组载体pIZ/V5-gp64进行酶切和连接,构建重组载体pIZ/V 5-gp64-HaCAD,将其转染棉铃虫细胞系Ha-E-1,通过筛选、细胞克隆和PCR验证,获得了重组钙粘蛋白基因的转基因细胞系Ha-T-CAD.免疫荧光法检测证实,钙粘蛋白在转基因细胞系Ha-T-CAD中成功表达.Western blot检测发现,在Ha-T-CAD细胞的膜蛋白中有140 kD大小的钙粘蛋白.转基因细胞系Ha-T-CAD的构建将为Bt杀虫晶体蛋白作用机理以及昆虫对Bt毒素的抗性机制研究提供基础资料.
|
| 关 键 词： | 钙粘蛋白 棉铃虫 转基因细胞系 GP64蛋白 蛋白表达 |
Establishment of a Novel Transgenic Insect Cell Line Displaying Cotton Bollworm (Helicoverpa armigera) Cadherin Protein on Membrane Surface |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Cadherin Cotton bollworm Transgenic cell line Gp64 protein Protein expression |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
