BBTV单克隆抗体的制备及其检测应用 |
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引用本文: | 宋西娇,刘欢,周雪平,洪健,吴舒艾,吴建祥. BBTV单克隆抗体的制备及其检测应用[J]. 农业生物技术学报, 2016, 0(2): 288-294. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.02.015 |
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作者姓名: | 宋西娇 刘欢 周雪平 洪健 吴舒艾 吴建祥 |
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作者单位: | 浙江大学生物技术研究所/国家水稻生物学重点实验室,杭州,310058 |
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基金项目: | 公益性行业(农业)科研专项(No.201203076-05) |
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摘 要: | 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉(Musa paradisiaca)生产的重要病毒.本研究旨在以制备的抗BBTV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心建立检测BBTV的血清学方法,从而为该病毒的诊断和科学防控提供技术支撑.通过改进提纯方法获得了提纯的BBTV,以BBTV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经细胞筛选和克隆,获得1株分泌抗BBTV单克隆抗体的杂交瘤细胞22E3,并制备其单抗腹水.用间接酶联免疫吸附试验(indirect-enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)方法测定制备的单抗腹水效价达到10-7,抗体类型及亚类为IgG1,κ轻链.Western blot检测表明,该单抗与BBTV外壳蛋白亚基有特异性反应.利用制备的单抗建立了检测BBTV的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA).该方法检测感染BBTV香蕉植物组织粗提液呈特异性阳性反应,而和健康香蕉组织呈阴性反应,说明建立的dot-ELISA方法能特异性地检测香蕉植物组织中的BBTV.灵敏度分析表明,以22E3单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测香蕉病组织的灵敏度达1∶640(W/V,g/mL).田间样品检测结果表明,建立的dot-ELISA方法能准确、可靠地用于香蕉中BBTV病毒的检测.BBTV单克隆抗体的制备及其dot-ELISA血清学检测方法的建立为我国香蕉上BBTV的诊断、无毒苗的生产及科学防控提供了物质和技术支撑.
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关 键 词: | 香蕉束顶病毒(BBTV) 单克隆抗体 Dot-ELISA |
Production and Application of Monoclonal Antibody Against BBTV |
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Abstract: | |
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Keywords: | Banana bunchy top virus (BBTV) Monoclonal antibody Dot-ELISA |
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