| 猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 黄娟,袁飞,韩先杰,李桂梅,单虎. 猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达[J]. 农业生物技术学报, 2016, 0(9): 1346-1353. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.09.008 |
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| 作者姓名： | 黄娟 袁飞 韩先杰 李桂梅 单虎 |
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| 作者单位： | 青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室,青岛,266109 |
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| 基金项目： | 国家科技基础性工作专项项目(No.2012FY111000)、山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(No.SDAIT-06-022-08)和山东省自主创新及成果转化专项(No.2014ZZCX07105) |
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| 摘 要： | 为了在昆虫细胞中表达猪圆环毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣壳蛋白,本研究设计合成引物从临床病料中扩增获得猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)山东株衣壳蛋白基因缺失核定位区的序列,并进行序列分析.将该片段克隆到杆状病毒供体载体pFastBac-1上,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli) DH 10-Bac感受态细胞,获得重组穿梭杆粒,将该杆粒转染到sf9昆虫细胞中,观察重组杆状病毒致细胞病变效应,并采用PCR、间接免疫荧光实验、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定衣壳蛋白的表达情况.结果表明,扩增获得的猪圆环病毒山东株属于PCV2d亚型,与我国目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亚型)在160～180 aa抗原位点有差异.成功构建了重组供体质粒pFastBac l-PCV2d-Cap和重组穿梭杆粒Bacmid-PCV2d-Cap,获得的重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了约24 kD的PCV2d-Cap,该蛋白可以与猪圆环病毒阳性血清及His标签抗体发生反应,证明具有良好的反应原性.本研究是我国首次采用杆状病毒系统表达PCV2d亚型衣壳蛋白,为制备PCV2d亚单位疫苗以及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒、防范PCV2d亚型流行提供了理论依据.
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| 关 键 词： | 猪圆环病毒2d亚型 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 基因分型 |
Expression of Porcine Circovirus Subtype 2 d Capsid Protein in Baculovirus/insect Cell Expression System |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Porcine circovirus subtype 2 d Capsid protein Baculovirus expression Genetic type |
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