| 棉铃虫精氨酸激酶(AK)的表达规律 |
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| 引用本文： | 赵洁,程婷婷,黄丽娜,马纪,刘小宁. 棉铃虫精氨酸激酶(AK)的表达规律[J]. 农业生物技术学报, 2016, 0(3): 397-405. DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.03.011 |
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| 作者姓名： | 赵洁 程婷婷 黄丽娜 马纪 刘小宁 |
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| 作者单位： | 新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室,乌鲁木齐,830046 |
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| 基金项目： | 国家自然基金(No.31471781)和大学生创新项目基金(No.201410755025) |
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| 摘 要： | 精氨酸激酶(arginine kinase,AK)是一种磷酸转移酶,参与无脊椎动物的细胞内能量代谢.为深入了解AK在棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 (cytochrome P450) CYP6B6基因表达过程中起到的作用和调控机理,基于酵母单杂交结果采用RT-PCR从棉铃虫中肠cDNA扩增得到棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK),构建大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株BL21:pET28a-HarmAK,异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后通过镍柱纯化获得目的蛋白,Western blot检测目的蛋白的表达和纯化结果,pH-分光光度法检测HarmAK蛋白的催化活性,qRT-PCR检测棉铃虫不同发育阶段和6龄幼虫不同组织中HarmAK基因的表达规律.研究结果表明,克隆得到HarmAK基因大小为1 068 bp,编码355个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别是39.8 kD和5.76.氨基酸序列分析表明,HarmAK蛋白不含信号肽和跨膜结构域.HarmAK在大肠杆菌BL21中为可溶蛋白,Western blot和pH-分光光度法结果显示,融合蛋白His-HarmAK的大小与预期一致,且活性达到(5.5±0.85) μmol/(min· mg),表明HarmAK能磷酸化L-精氨酸.HarmAK在棉铃虫的所有发育阶段和6龄幼虫的所有组织中均有表达,1龄幼虫及6龄幼虫中肠的表达量最高.本研究将为利用HarmAK基因作为分子靶标来控制棉铃虫的研究奠定基础.
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| 关 键 词： | 精氨酸激酶(AK) 棉铃虫 表达纯化 酶活分析 |
Expression Profile of Arginine Kinase (AK) from Cotton Bollworm (Helicoverpa armigera) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Arginine kinase (AK) Cotton bollworm Expression and purification Enzyme assay |
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