应用原生质体融合技术构建纤维素发酵产油脂菌株的试验 |
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作者姓名: | 张淑君 李伟庆 牟志美 王彦文 高绘菊 |
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作者单位: | 山东农业大学林学院,山东泰安,271018;山东农业大学林学院,山东泰安,271018;山东农业大学林学院,山东泰安,271018;山东农业大学林学院,山东泰安,271018;山东农业大学林学院,山东泰安,271018 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;中国博士后科学基金;山东省现代农业产业技术体系建设项目蚕桑创新团队项目;现代农业产业技术体系建设专项 |
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摘 要: | 原生质体融合(protoplast fusion)技术是将遗传性状不同的亲本原生质体融合杂交的基因重组技术。从健康桑树根系中分离到一株产油脂内生真菌MOD-1,采用酶解方法制备内生真菌MOD-1和产纤维素酶菌株绿色木霉TP4、T44及长柄木霉TL的原生质体,获得4个菌株的原生质体产量分别为7.02×10~6个/m L、4.43×10~6个/m L、6.35×10~6个/m L和4.35×10~6个/m L,再生率分别为4.90%、3.26%、4.51%和4.12%。优化亲本原生质体灭活条件为:MOD-1菌株经紫外线照射10 min或加热15 min,TP4菌株经紫外线照射25 min或加热20 min,T44菌株经紫外线照射25 min或加热25 min,TL菌株经紫外线照射30 min或加热25 min。在上述条件下各亲本原生质体的灭活率均达到100%。将灭活的MOD-1菌株原生质体分别与不同方式灭活的TP4、T44、TL菌株原生质体融合,经初筛和复筛获得了一株兼具MOD-1与TP4双亲优良性状的融合菌株MP-1,其油脂产量、油脂含量(质量分数)分别为0.082 4 g/L、14.46%,显著高于亲本菌株MOD-1。融合菌株MP-1传代培养10代后,油脂产量与油脂含量的遗传稳定性分别达到92.84%和95.00%。
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关 键 词: | 产油脂菌株 桑树内生真菌 菜豆壳球孢菌MOD-1 木霉 原生质体融合 菌株改良 |
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