| 蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 杨振兴,李占鸿,肖雷,谢佳芮,廖德芳,李卓然,李华春,朱建波,杨恒.蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用[J].华南农业大学学报,2021,42(3):17-25. |
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| 作者姓名： | 杨振兴 李占鸿 肖雷 谢佳芮 廖德芳 李卓然 李华春 朱建波 杨恒 |
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| 作者单位： | 云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南 昆明 650224 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31760744)；国家重点研发计划(2016YFD0500908，2017YFC1200505)；云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055) |
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| 摘 要： | 目的 建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)、流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus，EHDV)及帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus，PALV)快速筛查和诊断的三重RT-qPCR检测技术。方法 选择BTV的NS3、EHDV的NS1以及PALV的VP7基因作为靶基因，设计3组特异性引物和探针，建立3种病毒的三重RT-qPCR检测方法。对检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证，同时使用我国分离的BTV、EHDV与PALV不同血清型毒株和对应的阳性血液样本，与24个BTV血清型及6个EHDV血清型参考毒株对该三重法的检测效果进行验证。结果 三重RT-qPCR的扩增效率均可达90%以上，对3种病毒核酸拷贝数的检测下限均为10 μL-1级别，与单重法的检测灵敏度相当；与阿卡斑病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和牛流行热病毒之间无交叉反应；Ct值批内、批间变异系数均在2%以内；可检测出24种BTV血清型、6种EHDV血清型与3种PALV血清型，具有群特异性；可有效检测血液中的病毒核酸，检测结果与单重法一致。结论 本研究建立的BTV、EHDV与PALV三重RT-qPCR具有良好的敏感性、特异性和重复性，可用于临床样本中对3种病毒的同时诊断与筛查。
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| 关 键 词： | 三重RT-qPCR 蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 帕利亚姆血清群病毒 病毒检测 |
| 收稿时间： | 2020/7/22 0:00:00 |
Establishment and application of triplex RT-qPCR for detection of bluetongue virus, epizootic hemorrhagic disease virus and Palyam serogroup virus |
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| YANG Zhenxing,LI Zhanhong,XIAO Lei,XIE Jiarui,LIAO Defang,LI Zhuoran,LI Huachun,ZHU Jianbo,YANG Heng.Establishment and application of triplex RT-qPCR for detection of bluetongue virus, epizootic hemorrhagic disease virus and Palyam serogroup virus[J].Journal of South China Agricultural University,2021,42(3):17-25. |
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| Authors: | YANG Zhenxing LI Zhanhong XIAO Lei XIE Jiarui LIAO Defang LI Zhuoran LI Huachun ZHU Jianbo YANG Heng |
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| Institution: | Yunnan Veterinary and Animal Science Institute/Yunnan Tropical and Subtropical Animal Virus Disease Laboratory, Kunming 650224, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | triplex RT-qPCR bluetongue virus epizootic hemorrhagic disease virus Palyam serogroup virus virus detection |
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