| 采用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法对猪瘟强毒与疫苗弱毒的鉴别研究 |
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| 作者姓名： | 谢金文 李安 肖跃强 王金良 李峰 沈志强 崔言顺 |
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| 作者单位： | 1. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600
2. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018
3. 山东农业大学动物科技学院,山东泰安,271018 |
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| 基金项目： | 山东省自主创新成果转化重大专项(2008ZHZX11103);国家十一五科技支撑计划项目(2006BAD06A14-9);山东省自然科学基金(ZR2010CQ012) |
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| 摘 要： | 为建立一种能够区分猪瘟病毒(CSFV)强毒与弱毒疫苗C株的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法,本研究对GenBank中登录的25株CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗C株全基因组序列进行比较分析,设计一对共用下游引物以及分别针对CSFV强毒株与弱毒疫苗的特异性上游引物,其Tm值分别为84.5±0.5℃和88.5±0.5℃,熔解曲线分析显示为单特异峰.检测结果显示本实验建立的鉴别CSFV强毒感染与弱毒疫苗的荧光定量RT-PCR结合熔解曲线分析方法特异性强,对其他相关病毒无特异性扩增；敏感性高,最低检出量为5×RID50的细胞疫苗基因组拷贝；重复性好；并且扩增效率高、线性范围广、检测时间短,可对免疫猪群中CSFV强毒感染做出快速准确的鉴别检测,为有效防制猪瘟提供依据.
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| 关 键 词： | 猪瘟 定量检测 熔解曲线 鉴别诊断 |
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