| 甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 黄东亮,秦翠鲜,陈忠良,桂意云,李双喜,汪淼,廖青,李杨瑞.甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB的克隆及原核表达[J].南方农业学报,2013,44(4):545-551. |
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| 作者姓名： | 黄东亮 秦翠鲜 陈忠良 桂意云 李双喜 汪淼 廖青 李杨瑞 |
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| 作者单位： | 广西农业科学院甘蔗研究所/广西甘蔗遗传改良重点实验室/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室中国农业科学院甘蔗研究中心广西农业科学院农业资源与环境研究所,南宁530007 |
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| 基金项目： | 广西农业科学院基本科研业务专项项目广西自然科学基金国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的]克隆甘蔗B家族SofSPSB基因并进行原核表达,为进一步研究甘蔗SPS酶学特性及SPS活性调控机制奠定基础.方法]在进化分析的基础上,通过同源克隆获得甘蔗SofSPSB基因部分序列,再结合RACE技术获得全长cDNA序列.扩增SofSPSB基因ORF并连到原核表达载体pETBlue-2上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.结果]通过比对B家族中进化关系很近的玉米(Zea mays)ZmSPS1和水稻(Oryza sativa) OsSPS1基因序列,并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗B家族SPS基因(SofSPSB) 2330 bp序列.结合5'-RACE和3'-RACE技术获得3481 bp SofSPSB基因全长cDNA序列,该序列包含一个3225 bp的开放阅读框(ORF);起始密码子(ATG)位于转录起始位点后56 bp处,终止密码子(TGA)后有一段201 bp的非编码序列,并带有真核生物典型的polyA尾巴;编码1074个氨基酸,SofSPSB与Zm-SPS1、OsSPS1的核苷酸序列同源性分别为94.7%和81.3%,氨基酸序列同源性分别为96.0%和83.9%;其理论分子量Mw=118.96 kDa,等电点pI=6.30.经原核表达后纯化获得带6×His标签的融合蛋白.结论]克隆获得甘蔗B家族Sof-SPSB基因全长cDNA序列,成功构建了SofSPSB基因原核表达载体,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.
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| 关 键 词： | 甘蔗 蔗糖磷酸合成酶 SofSPSB 克隆 原核表达 |
Cloning and prokaryotic expression of sucrose phosphate synthase gene (SofSPSB) in sugarcane |
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