| 猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达 |
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| 引用本文： | 于天飞,董慧莹,谢鹏宇,等.猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2020,48(1):49-56. |
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| 作者姓名： | 于天飞 董慧莹 谢鹏宇 等 |
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| 作者单位： | 齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院,黑龙江省抗性基因工程与寒地生物多样性保护重点实验室,齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院,齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院 |
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| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金项目（QC2014C034）；黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划项目（UNPYSCT-2015093）；黑龙江省省属高等学校基本科研业务费植物性食品加工技术特色学科专项（YSTSXK201881）；齐齐哈尔大学研究生创新科研项目（YJSCX2017-030X） |
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| 摘 要： | 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID_(50)为5×10~2 mL~(-1)。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。
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| 关 键 词： | 猪传染性胃肠炎病毒 spike蛋白 亲和肽 原核表达 |
| 收稿时间： | 2018/11/25 0:00:00 |
Prokaryotic expression of affinity peptides to spike protein of transmissible gastroenteritis virus |
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| YU Tianfei,DONG Huiying and XIE Pengyu,et al.Prokaryotic expression of affinity peptides to spike protein of transmissible gastroenteritis virus[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2020,48(1):49-56. |
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| Authors: | YU Tianfei DONG Huiying and XIE Pengyu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | transmissible gastroenteritis virus of swine spike protein affinity peptides prokaryotic expression |
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