| 悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定 |
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| 引用本文： | 王海春,贾红,袁维峰,侯绍华,郭晓宇,鑫婷,朱鸿飞.悬浮培养Sf21细胞高效表达牛γ-干扰素及其特性鉴定[J].中国畜牧兽医,2012,39(11):1-6. |
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| 作者姓名： | 王海春 贾红 袁维峰 侯绍华 郭晓宇 鑫婷 朱鸿飞 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100193 |
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| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项经费项目，863计划，中央级公益性科研院所基本科研业务费，"十一五"国家科技支撑计划重点项目，2011年及2012年农业部动物疫情监测与防治项目 |
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| 摘 要： | 本试验旨在研究重组牛γ-干扰素(rBovIFN-γ)在Sf21细胞中高效表达及其特性鉴定。利用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出不含信号肽的BovIFN-γ基因片段。将其克隆到pFastBacTMHTA中构建重组质粒pFastBacTMHTA-BovIFN-γ。然后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid-BovIFN-γ。转染Sf21昆虫细胞后获得重组杆状病毒rBac-BovIFN-γ,应用Sf21细胞悬浮培养技术大量表达rBovIFN-γ。利用Western blotting、质谱分析(MS)、抗病毒试验等对rBovIFN-γ进行鉴定。Western blotting分析显示,rBovIFN-γ具有良好的反应原性;MS分析表明,rBovIFN-γ的6个肽段序列与牛IFN-γ的氨基酸序列完全匹配,在蛋白质质谱数据库中搜索结果为牛IFN-γ;MDBK/VSV抗病毒试验显示,rBovIFN-γ具有很高的抗病毒活性,为1.05×105 IU/mg。
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| 关 键 词： | 牛γ-干扰素 杆状病毒 悬浮培养 质谱分析 抗病毒活性 |
| 收稿时间： | 2012-05-19 |
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