| 昆虫死亡素thanatin与斑点叉尾鮰β-防御素在毕赤酵母中的表达及其抑菌效果评价 |
| |
| 引用本文： | 何敬文,陈婷,赵微,扈立伟,任君,刘青,顾天越,包利霞,金天明.昆虫死亡素thanatin与斑点叉尾鮰β-防御素在毕赤酵母中的表达及其抑菌效果评价[J].畜牧与兽医,2023(4):72-78. |
| |
| 作者姓名： | 何敬文 陈婷 赵微 扈立伟 任君 刘青 顾天越 包利霞 金天明 |
| |
| 作者单位： | 1. 天津农学院/天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室;2. 天津市农业科学院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然基金项目(31572492)；;天津市科技支撑项目(19ZXBTSN00250)； |
| |
| 摘 要： | 旨在利用毕赤酵母表达系统表达出具有良好抑菌效果的重组抗菌肽。选定昆虫死亡素thanatin基因和斑点叉尾鮰β-防御素基因(命名为defbl),按毕赤酵母偏好性密码子优化后，将用T2A剪切肽连接的共表达基因(命名为TD)及各单基因分别构建至pMD19-T载体上，经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切后亚克隆至表达载体pPICZɑA上，经SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中，通过Zeocin抗性及PCR筛选出阳性菌株，利用1%甲醇进行诱导表达，72 h后收集培养基上清液，冻干浓缩并纯化后，进行Western blot检测及体外抑菌试验、溶血性试验。结果显示，成功构建重组毕赤酵母工程菌株GS115-pPICZαA-thanatin、GS115-pPICZαA-defbl和GS115-pPICZαA-TD,通过甲醇诱导成功获得重组蛋白，纯化后Western blot检测结果显示，thanatin组和defbl组分别在2.3 kDa和7.8 kDa处出现特异性条带，TD组同时出现上述2条带，蛋白大小均与预期相符；3个重组蛋白浓度分别为600、300和700μg/mL;体外抑菌试验及溶血性...
|
| 关 键 词： | 死亡素thanatin 斑点叉尾鮰β-防御素 抑菌效果 溶血性试验 |
|
|
