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| 鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达 | |
| 引用本文： | 尤钊,左珂朦,余祖华,丁轲,王垚垚,刘彤,张梦珂,邱静静.鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达[J].中国畜牧兽医,2018,45(7):1791-1797. |
| 作者姓名： | 尤钊 左珂朦 余祖华 丁轲 王垚垚 刘彤 张梦珂 邱静静 |
| 作者单位： | 1. 河南科技大学动物疫病与公共卫生重点实验室, 洛阳 471003; 2. 河南科技大学宏翔生物饲料实验室, 洛阳 471003 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（U1504308、31702207）；河南科技大学博士科研启动基金项目（13480068）；河南科技大学大学生研究训练计划（SRTP）项目（2017317） |
| 摘 要： | 为构建鸡维甲酸相关孤核受体α（retinoid acid receptor related orphan receptor α，RORα）的真核表达载体，并检测其在MSB1细胞中的表达效果，本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列（登录号：NM_001289887.1）设计特异性引物，从鸡肝脏组织中提取总RNA，经反转录合成cDNA，以此为模板进行PCR扩增，将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体，构建克隆载体pMD18-T-RORα，再用Sal Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1，将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接，构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα，经PCR、酶切和测序验证准确性后，将其转染MSB1细胞，于转染后48 h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况，并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示，从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600 bp的特异性片段，用Sal Ⅰ和BamH Ⅰ可切出大小约4 700和1 600 bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示，转染MSB1细胞48 h后，与对照组相比，重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加（P<0.05）。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体，该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα，为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。 |
| 关 键 词： | 鸡 甲酸相关孤核受体&alpha (ROR&alpha )基因 真核表达载体 MSB1细胞 表达 |
| 收稿时间： | 2017-12-01 |
Construction of Chicken RORα Eukaryotic Expression Vector and Its Expression in MSB1 Cell |
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| YOU Zhao,ZUO Kemeng,YU Zuhua,DING Ke,WANG Yaoyao,LIU Tong,ZHANG Mengke,QIU Jingjing.Construction of Chicken RORα Eukaryotic Expression Vector and Its Expression in MSB1 Cell[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2018,45(7):1791-1797. | |
| Authors: | YOU Zhao ZUO Kemeng YU Zuhua DING Ke WANG Yaoyao LIU Tong ZHANG Mengke QIU Jingjing |
| Institution: | 1. Key Laboratory of Animal Disease and Public Health of Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China; 2. Hongxiang Biological Feed Laboratory of Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | chicken ROR&alpha gene eukaryotic expression vector MSB1 cell expression |
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