| 应用抑制性差减杂交技术分离椪柑枯水相关基因 |
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| 引用本文： | 杨明,王日葵,周炼,葛文东,焦雁翔.应用抑制性差减杂交技术分离椪柑枯水相关基因[J].中国农业科学,2012,45(5):917-925. |
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| 作者姓名： | 杨明 王日葵 周炼 葛文东 焦雁翔 |
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| 作者单位： | 1.西南大学园艺园林学院，重庆 400715
2.中国农业科学院柑桔研究所，重庆 400712
3.西南大学食品科学学院，重庆 400715 |
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| 基金项目： | 重庆市自然科学基金项目(CSTC,2010BB1154);重庆市科技攻关项目(CSTC,2011AC1023);国家公益性行业(农业)科研专项(201203034) |
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| 摘 要： | 【目的】探索椪柑枯水分子机理，寻找柑橘枯水应答基因，为柑橘枯水防治奠定基础。【方法】利用抑制性差减杂交技术以椪柑正常果肉cDNA作为Driver，以枯水果肉cDNA作为Tester构建正向差减文库。【结果】挑选了300个有效克隆进行测序分析，260个测序成功。经BLASTx比对分析，197条表达序列标签（ESTs）找到了分属于52个基因的同源序列；63条ESTs同源性较低或没有同源性。对文库中编码β-微管蛋白、衰老相关蛋白、细胞色素c、半胱氨酸蛋白酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、转运蛋白、天冬氨酸蛋白酶前体、WRKY转录因子21的基因进行实时定量RT-PCR验证，结果显示这8个基因均明显上调表达。这些差异性表达基因主要涉及衰老、抗逆防御、几丁质和细胞壁代谢、蛋白降解等过程。【结论】通过构建椪柑果肉枯水正向文库，得到一些与枯水相关的基因，这些基因反映了果实对枯水的调控情况，可作为今后防治枯水病害的候选基因。
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| 关 键 词： | 椪柑 抑制性差减杂交 枯水 表达序列标签 差减文库 聚类分析 |
| 收稿时间： | 2011-08-22 |
Molecular Cloning of Waterless-Related Genes in Ponkan Mandarin Using Suppression Subtractive Hybridization |
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| YANG Ming
,
WANG Ri-kui
,
ZHOU Lian
,
GE Wen-dong
,
JIAO Yan-xiang.Molecular Cloning of Waterless-Related Genes in Ponkan Mandarin Using Suppression Subtractive Hybridization[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(5):917-925. |
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| Authors: | YANG Ming WANG Ri-kui ZHOU Lian GE Wen-dong JIAO Yan-xiang |
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| Institution: | 1College of Horticulture and Landscape Architecture,Southwest University,Chongqing 400715;2 Citrus Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Chongqing 400712;3College of Food Science,Southwest University,Chongqing 400715) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ponkan Mandarin suppression subtractive hybridization waterlessness expressed sequence tags subtractive library gene ontology |
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