柔嫩艾美耳球虫BJ株EtlA基因的克隆及序列分析

本文参照已发表的柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)折光体蛋白基因序列，根据其阅读框及载体序列特点，两端分别加上EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点设计引物，以E．tenella BJ株的总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，成功扩增出EtlA基因。将PCR产物与pGEM—T载体连接后，转化JM109感受态细胞，蓝白斑法筛选阳性克隆并测序。测序表明，该基因全长1978bp，其阅读框大小为1944bp；与Gen Bank登记的EtlA基因相比较，有6个部位、共7个碱基发生了突变，其中5个有意义突变，2个无意义突变，同源性达99．5％。与堆型艾美耳球虫(E．acervulina)的EalA基因的同源性为79．3％，而与牛艾美耳球虫(E．bovis)的同源性只有19．5％。表达产物具有核苷酸转氢酶的功能，推测可为子孢子侵入宿主细胞提供能量。