家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达

以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增，产物经TA克隆测序鉴定后，亚克隆至原核融合表达载体PET50（b）（含有编码64．3kD的Nus．Tag蛋白标签）中，在大肠杆菌BL21（DE3）中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法，以空载和未诱导菌体作对照，对细菌总蛋白进行电泳分析，结果表明：经1mmol／L IPTG诱导2h后，即能看到1条大约120kD的蛋白质特异带，与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较，发现在诱导时间为2h，温度为32℃，IPTG浓度为0．6mmol／L的诱导条件下，融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。