蓝狐脑炎原虫病的诊断与鉴定

某养殖场幼龄蓝狐(Alopex lagopus)不同程度脱水、生长停滞,剖检可见肾脏苍白肿大。取肾脏、脑组织研磨,差速离心后染色检测到典型脑炎原虫形态,大小1～2μm。肾脏石蜡切片经革兰染色、改良马松三色染色观察到大量染色虫体。肾脏研磨液提取基因组DNA,根据NCBI的脑炎原虫(Encephalitozoon cuniculi,E.cuniculi)基因组设计2对特异性引物,分别扩增脑炎原虫核糖体DNA内转录间隔区1(ITS1)和极管蛋白1(PTP1)的基因片段。PCR结果显示,引物ITS1和PTP1分别扩增出762 bp和1 071 bp的片段,两片段序列与脑炎原虫相应序列的相似性均为99.7%。对ITS1基因序列进行分析,鉴定为脑炎原虫基因Ⅲ型。此外,PTP1基因的系统进化树分析了该菌株(称为JL-1),与2014年辽宁LN-1株、2001年美国CDC. V282株关系最近。