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烟草4CL与虎杖STS融合基因原核表达载体的构建
引用本文:张红,刘霄霄,解语晨,马雅迪,杨静,马兰青,杨明峰,王有年. 烟草4CL与虎杖STS融合基因原核表达载体的构建[J]. 北京农学院学报, 2013, 28(3)
作者姓名:张红  刘霄霄  解语晨  马雅迪  杨静  马兰青  杨明峰  王有年
作者单位:北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院,农业部都市农业北方重点实验室,北京102206
基金项目:国家自然科学基金项目,北京市自然科学基金重点项目,北京市教委面上项目,北京市属高校人才强教深化计划项目
摘    要:植物次生代谢产物白藜芦醇具有抗肿瘤、保护心血管、抗氧化的药理作用。通过分子生物学技术利用带有13个氨基酸的链接序列(linker)将来自烟草的4-香豆酰辅酶A连接酶(4-Coumarate-CoA ligase,4CL)和虎杖的白藜芦醇合酶(Stilbene synthase,STS)的基因连接,构建成融合基因,并转入原核表达载体。为后续的白藜芦醇的代谢工程奠定了基础。但该研究中所构建的融合基因与原基因相比有7个碱基突变,导致4个氨基酸的改变。这些突变是否会影响到融合酶的活性,试验所引入的13个氨基酸的linker对于融合蛋白活性的影响等都还待后续进一步研究。

关 键 词:次生代谢  白藜芦醇  引物悬挂PCR  融合基因  双功能酶

Construction of prokaryotic expression vector containing tobacco 4CL and Polygonum cuspidatum STS fusion gene
Abstract:The pharmacological function of resveratrol is anti-tumor,cardiovascular protection,antioxidant.In this paper,the fusion gene Nt4CL::PcSTS was constucted by using a link sequence(linker)of 13amino acids.The gene was cloned into the prokaryotic expression vector pET30a.But the sequencing results showed that there were 7nucleotide mutation sites in the fusion gene,result in four amino acid changes.Further experiment will be interesting to the changes and linker which affect fusion protein activity.
Keywords:plant secondary metabolites  resveratrol  overlap PCR  fusion gene  bifunctional enzyme
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