牦牛α-干扰素基因的克隆及其原核表达的研究

植物血凝素（PHA）诱导培养牦牛外周血淋巴细胞，提取总RNA，采用RT—PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因，分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后，再分别构建原核表达重组质粒，用SDS-PAGE和Westernblot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分析表明，牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为570bp，与NCBI上发表的奶牛IFN-α-A参考序列同源性为94．4％，与黄牛INF-α-B基因（M10953）的同源性最高，为97．0％；牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为588bp，与NCBI上发表的奶牛IFN-α-Ⅱ参考序列同源性为94．2％，与黄牛IFN-δ—1基因（XM-871297）的同源性最高，为96．1％。分子遗传进化树分析表明牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ与黄牛、奶牛和水牛亲缘关系最近，与猪、马、人的次之，与其它动物都较远，说明这两基因均具有种属差异性。诱导表达重组蛋白分析表明，pGEX4T／IFN-α-A和pGEX4T／IFN-α-Ⅱ在大肠杆菌中得到了正确表达，均可表达约44ku的融合蛋白，主要以包涵体形式存在，且具有与抗血清发生反应的生物活性。