牦牛α-干扰素基因的克隆及其原核表达的研究 |
| |
作者姓名: | 景志忠 李玉萍 窦永喜 陈国华 房永祥 才学鹏 |
| |
作者单位: | 1. 中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃省动物寄生虫病重点实验室/家畜疾病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046 2. 中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃省动物寄生虫病重点实验室/家畜疾病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;甘肃省农业科学院,甘肃,兰州,730070 |
| |
基金项目: | 甘肃省自然科学基金 , 国家高技术研究发展计划(863计划) |
| |
摘 要: | 植物血凝素(PHA)诱导培养牦牛外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT—PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因,分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后,再分别构建原核表达重组质粒,用SDS-PAGE和Westernblot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分析表明,牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为570bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-A参考序列同源性为94.4%,与黄牛INF-α-B基因(M10953)的同源性最高,为97.0%;牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为588bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-Ⅱ参考序列同源性为94.2%,与黄牛IFN-δ—1基因(XM-871297)的同源性最高,为96.1%。分子遗传进化树分析表明牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ与黄牛、奶牛和水牛亲缘关系最近,与猪、马、人的次之,与其它动物都较远,说明这两基因均具有种属差异性。诱导表达重组蛋白分析表明,pGEX4T/IFN-α-A和pGEX4T/IFN-α-Ⅱ在大肠杆菌中得到了正确表达,均可表达约44ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,且具有与抗血清发生反应的生物活性。
|
关 键 词: | 牦牛IFN-α-A基因 牦牛IFN-α-Ⅱ基因 分子克隆 遗传演化关系 表达分析 牦牛 干扰素 基因 克隆 原核表达 研究 expression Cloning Escherichia coli 生物活性 反应 发生 抗血清 存在 包涵体 融合蛋白 正确表达 大肠杆菌 种属差异性 动物 |
文章编号: | 1008-0589(2008)03-0194-06 |
收稿时间: | 2007-08-08 |
修稿时间: | 2007-08-08 |
本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录! |
|