| 多拷贝脂肪酶基因在黑曲霉中表达研究 |
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| 引用本文： | 李杰,张贺,王欣,黄超群,徐玥,张会,刘天奇.多拷贝脂肪酶基因在黑曲霉中表达研究[J].东北农业大学学报,2018(4):49-58. |
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| 作者姓名： | 李杰 张贺 王欣 黄超群 徐玥 张会 刘天奇 |
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| 作者单位： | 东北农业大学生命科学学院,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 黑龙江省应用技术研究与开发计划重大项目(GA15B203) |
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| 摘 要： | 文章在使用含6个gla A box强启动子Pgla A6R和高效分泌信号肽Sgla A调控黑曲霉脂肪酶基因Anlip A表达基础上,用pyr G双向筛选标记,应用多拷贝黑曲霉脂肪酶基因策略,构建含1个拷贝Anlip A基因表达载体p SZHA6R-Anlip A和含2个拷贝Anlip A基因表达载体p SZHA6R-2Anlip A,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462(Δpyr GΔas AA::pyr G),获得as AA基因位点整合纯合同源重组转化子CICC2462(p SZHA6R-Anlip A)和CICC2462(p SZHA6R-2Anlip A)。重组菌株经摇瓶发酵后,作荧光定量PCR、SDS-PAGE和脂肪酶活力检测。结果表明,重组菌株可分泌表达约37.0 ku目的蛋白条带,CICC2462(p SZHA6R-2Anlip A)中脂肪酶表达在m RNA水平和酶活水平皆高于CICC2462(p SZHA6R-Anlip A)。发酵第5天CICC2462(p SZHA6R-2Anlip A)中Anlip A基因转录水平为CICC2462(p SZHA6R-Anlip A)1.26倍。二者酶活力在发酵第8天达峰值,此时CICC2462(p SZHA6R-2Anlip A)是CICC2462(p SZHA6R-Anlip A)1.32倍,酶活力达1 480 U·m L-1。对重组菌株CICC2462(p SZHA6R-2Anlip A)第8天发酵液作酶学性质分析,结果表明,最适温度为35℃,最适p H为6.0。获得1株高效分泌表达脂肪酶食品级黑曲霉工程菌。
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| 关 键 词： | 脂肪酶 多拷贝 分泌表达 黑曲霉 lipase multiple copies secretory expression Aspergillus niger |
Expression of multicopy lipase gene in Aspergillus niger |
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| LI Jie,ZHANG He,WANG Xin,HUANG Chaoqun,XU Yue,ZHANG Hui,LIU Tianqi.Expression of multicopy lipase gene in Aspergillus niger[J].Journal of Northeast Agricultural University,2018(4):49-58. |
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| Authors: | LI Jie ZHANG He WANG Xin HUANG Chaoqun XU Yue ZHANG Hui LIU Tianqi |
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