| Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究 |
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| 引用本文： | 孙宇桐,邹琪琪,孙菊鲜,孙晓宇,齐姗姗,辛琪,葛欣.Methylocorus sp. MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究[J].浙江农业科学,2018,59(6):1010-1014. |
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| 作者姓名： | 孙宇桐 邹琪琪 孙菊鲜 孙晓宇 齐姗姗 辛琪 葛欣 |
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| 作者单位： | 河北大学 生命科学学院,河北 保定 071002 |
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| 基金项目： | 河北省自然科学基金(C2015201157,C2015201156); 河北省高等学校科学技术研究项目(BJ2016008) |
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| 摘 要： | Methylocorus sp. MP 688 菌株具有高产吡咯喹啉醌的特性而应用于工业生产当中。分析其全基因组及代谢通路,发现在C1固定中丝氨酸循环起到重要的生理作用。为了研究丝氨酸循环中glyA基因是否具有表达丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)活性及基因缺失是否会对菌株生命活动产生影响。采用体外表达方式,纯化并检测glyA基因产物SHMT酶是否具有催化活性。通过双交换实验进行glyA基因敲除,探究glyA基因缺失是否会对菌株产生影响。结果表明,glyA 基因成功在体外表达,双交换敲除实验证明glyA基因作为关键基因存在,其缺失或可致死。此外,SHMT酶在35 ℃,pH值7.5缓冲体系中酶促效率最高,还原剂β-巯基乙醇对SHMT酶催化活性具有促进作用。
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| 关 键 词： | glyA基因 丝氨酸羟甲基转移酶 体外表达 双交换敲除 |
| 收稿时间： | 2018-03-27 |
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