| 鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用 |
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| 引用本文： | 亓丽红,黄兵,吴家强,宋玲玲,王友令,马秀丽,于可响,刘涛,艾武,徐怀英.鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用[J].浙江农业科学,2018,59(5):866-870. |
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| 作者姓名： | 亓丽红 黄兵 吴家强 宋玲玲 王友令 马秀丽 于可响 刘涛 艾武 徐怀英 |
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| 作者单位： | 山东省农业科学院 家禽研究所,山东 济南 250023 |
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| 基金项目： | 山东省2017年度农业重大应用技术创新项目“肉鸡呼吸道疾病的监测和防控技术集成与示范”; 山东省重点研发计划项目“山东省血清4型禽腺病毒病流行病学及防控技术研究”(2016GNC110009); 山东省农业科学院农业科技创新工程“主要畜禽疫病监测和预警”(CXGC2016A10); 山东省自然科学基金“不同致病型鸡传染性支气管炎病毒S1基因变异及其受体结合域吸附能力的影响”(ZR2017MC038) |
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| 摘 要： | 为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenBank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC2的N基因序列,设计一对引物,扩增N基因,将目的基因与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-N,转化E. coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-N,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV N基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2 μg·孔-1,血清最佳稀释度为1:200,临界值为D450值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的N-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV N蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 表达 ELISA 抗体 检测 |
| 收稿时间： | 2018-02-08 |
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