| 弓形虫MAPK1基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 宫上舒,赵权,刘全.弓形虫MAPK1基因的克隆与原核表达[J].吉林农业大学学报,2015(2):221-225,236. |
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| 作者姓名： | 宫上舒 赵权 刘全 |
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| 作者单位： | 1. 吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118
2. 军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130122 |
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| 基金项目： | 吉林省重点科技公关项目，国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 为获取具有生物学活性的弓形虫MAPK1蛋白,根据Gen Bank中编码MAPK1的已知序列设计并合成1对引物,用NCoⅠ和HindⅢ双酶切后,连接到同样双酶切的原核表达载体PET-28a上,构建重组表达质粒PET-28a-MAPK1并转化至E.coli BL21感受态,用IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,纯化后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明:表达质粒在E.coli BL21中得到表达,克隆的MAPK1基因与Gen Bank中收录的基因序列同源性为99.9%。对重组质粒进行酶切鉴定,获得1 599 bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒PET-28a-MAPK1。Ni2+螯合柱纯化后蛋白浓度为0.26 mg/m L,可用作免疫原,经SDS-PAGE电泳显示PET-28a-MAPK1融合蛋白的分子量约为58 ku。Western blotting显示融合蛋白具有良好的抗原性。
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| 关 键 词： | 弓形虫 MAPK1基因 克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of MAPK1 Gene of Toxoplasma gondii |
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| GONG Shangshu,ZHAO Quan,LIU Quan.Cloning and Prokaryotic Expression of MAPK1 Gene of Toxoplasma gondii[J].Journal of Jilin Agricultural University,2015(2):221-225,236. |
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| Authors: | GONG Shangshu ZHAO Quan LIU Quan |
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| Institution: | GONG Shang-shu;ZHAO Quan;LIU Quan;College of Animal Science and Technology,Jilin Agricultural University;Veterinary Institute,Academy of Military Medical Sciences; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxoplasma gondii MAPK1 gene cloning prokaryotic expression |
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