| 利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体 |
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| 引用本文： | 王聪颖,陈书霞,陈 巧,郝丽宁,孟焕文,万旭花,申晓青,程智慧.利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体[J].西北农业学报,2013,22(2):152-158. |
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| 作者姓名： | 王聪颖 陈书霞 陈 巧 郝丽宁 孟焕文 万旭花 申晓青 程智慧 |
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| 作者单位： | （西北农林科技大学 园艺学院，农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，陕西杨凌 712100） |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31071813)；高校基本科研业务费(QN2011088)；西北农林科技大学国际合作基金(A213021102)；陕西省留学人员科技活动项目择优资助经费（A289021202）。 |
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| 摘 要： | 为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响，设计1对特异引物，以黄瓜pDONR201 HPL质粒为模板，通过PCR扩增出323 bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术，将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323 bp的片段进行测序，测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上，通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8，构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8 HPLi，分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323 bp的片段，与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8 HPLi转化农杆菌GV3101，经菌液PCR扩增获得323 bp的目的条带，表明RNAi表达载体pHellsgate8 HPLi已成功转入农杆菌中。
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| 关 键 词： | 黄瓜 HPL基因 RNAi干扰 克隆载体 表达载体 Gateway技术 |
Construction of RNAi Vectors for HPL Gene of Cucumber Using Gateway Technology |
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| WANG Congying,CHEN Shuxi,CHEN Qiao,HAO Lining,MENG Huanwen,WAN Xuhu,SHEN Xiaoqing and CHENG Zhihui.Construction of RNAi Vectors for HPL Gene of Cucumber Using Gateway Technology[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2013,22(2):152-158. |
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| Authors: | WANG Congying CHEN Shuxi CHEN Qiao HAO Lining MENG Huanwen WAN Xuhu SHEN Xiaoqing and CHENG Zhihui |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cucumber HPL gene RNA interference Cloning vector Expression vector Gateway technology |
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