茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析

【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达，了解茶树花蕾的发育机理，利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因，通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1 110个茶树花蕾cDNA片段中，122个（10.9%）是差异性表达的，其中87个在发育晚期特异表达，包括茶树14-3-3蛋白基因（GenBank登录号：DQ444463），其全长为1 072 bp，包含1个由783个核苷酸组成的ORF，编码260个氨基酸，5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸，该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。

Cloning and Analysis of Differential Expression of a 14-3-3 Protein Gene from Tea Flower Bud