| 猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 刘邓,冉多良,袁秀芳,徐丽华,牛登元,张存,王朝文,王一成. 猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2010, 0(2) |
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| 作者姓名： | 刘邓 冉多良 袁秀芳 徐丽华 牛登元 张存 王朝文 王一成 |
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| 作者单位： | 刘邓(新疆农业大学,新疆,乌鲁木齐,830052;浙江省农业科学院,畜牧兽医研究所猪病研究室,浙江,杭州,310021);冉多良(新疆农业大学,新疆,乌鲁木齐,830052);袁秀芳,徐丽华,牛登元,张存,王一成(浙江省农业科学院,畜牧兽医研究所猪病研究室,浙江,杭州,310021);王朝文(甘肃农业大学,甘肃,兰州,730070) |
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| 基金项目： | 浙江省科技计划重点项目 |
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| 摘 要： | 为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDV CH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达栽体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析.结果表明:目的基因含有1个长966 bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398 bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌E.coli BL21-DL3(Rosetta)中,在1PTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6 ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性.
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| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 S基因 原核表达 免疫学活性 |
Prokaryotic expression and immunogenicity analysis of S gene of Porcine epidemic diarrhea virus CH/ZJ strain |
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