| 腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2)过表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 付常振,刘扬,昝林森,王虹,成功,王嘉力.腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2)过表达载体的构建与鉴定[J].农业生物技术学报,2013,21(8):993-1001. |
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| 作者姓名： | 付常振 刘扬 昝林森 王虹 成功 王嘉力 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物科技学院 杨凌712100
2. 西北农林科技大学动物科技学院 杨凌712100;国家肉牛改良中心,杨凌712100 |
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| 基金项目： | "十二五"国家高技术研究发展计划(863)，国家自然科学基金项目，"十二五"国家转基因育种重大专项，国家现代农业产业技术体系建设专项 |
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| 摘 要： | 固醇调节元件结合蛋白2（sterol regulatory element binding protein 2,SREBP2）属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,在胆固醇的代谢过程中具有重要的调控作用。克隆秦川牛（Bos taurus）的SREBP2基因并构建相应腺病毒过表达载体,包装扩繁获得高滴度腺病毒,对于在细胞水平上研究SREBP2基因的功能和作用机制具有重要作用。本研究以秦川牛脂肪组织为实验材料,提取总RNA并反转录为cDNA,依据GenBank收录的牛的SREBP2基因（Accession No.NM001205600）mRNA序列设计引物,克隆出SREBP2基因编码区（coding sequence,CDS）全长。将SREBP2基因与穿梭载体连接构建pAdTrack-CMV-SREBP2表达载体,用PmeⅠ分别酶切线性化pAdTrack-CMV-SREBP2和空白对照pAdTrack-CMV载体并转化含有骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌（Escherichia coli）BJ5183感受态进行同源重组,得到腺病毒重组载体pAd-SREBP2和pAd-CMV,分别用PacⅠ酶切后胶回收DNA大片段,并将回收产物转染293A细胞包装得到腺病毒Ad-SREBP2和Ad-CMV,增殖并提高病毒滴度,得到高滴度病毒后,用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记法测定显示Ad-SREBP2和Ad-CMV的病毒滴度分别为7×108和1.3×109GFU/mL。将Ad-SREBP2和Ad-CMV腺病毒侵染秦川牛前体脂肪细胞检测病毒的有效性,实时定量PCR检测结果显示,侵染48h时SREBP2基因的表达量提高了102.3倍。本研究成功克隆了秦川牛的SREBP2基因,构建了病毒重组体,包装增殖获得了高滴度病毒,为在细胞水平上基因功能的研究提供了基础资料。
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| 关 键 词： | 秦川牛 固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2) 胆固醇 腺病毒 |
Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector Specific to Qinchuan Cattle(Bos taurus) Derived Sterol Regulatory Element Binding Protein 2 Gene (SREBP2) |
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| FU Chang-Zhen
,
LIU Yang
,
ZAN Lin-Sen
,
WANG Hong
,
CHENG Gong
,
WANG Jia-Li.Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector Specific to Qinchuan Cattle(Bos taurus) Derived Sterol Regulatory Element Binding Protein 2 Gene (SREBP2)[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2013,21(8):993-1001. |
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| Authors: | FU Chang-Zhen LIU Yang ZAN Lin-Sen WANG Hong CHENG Gong WANG Jia-Li |
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| Institution: | 1 College of Animal Science and Technology, Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 712100, China; 2 National Beef Cattle Improvement Center of Northwest Agricultural and Forestry University, Yangling 712100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Qinchuan cattle Sterol regulatory element binding protein 2 gene(SREBP2) Cholesterol Adenovirus |
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