| 新型冠状病毒Omicron变异株RBD二聚体蛋白抗体的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 王婷,陶飞飞,刘仕国,余文捡,王宇,黎美凤,李名志,刘树荣,王毅豪,孔令保.新型冠状病毒Omicron变异株RBD二聚体蛋白抗体的制备与鉴定[J].江西农业大学学报,2023(4):972-982. |
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| 作者姓名： | 王婷 陶飞飞 刘仕国 余文捡 王宇 黎美凤 李名志 刘树荣 王毅豪 孔令保 |
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| 作者单位： | 1. 江西农业大学生物科学与工程学院;2. 南昌市动物病毒与基因工程重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31860038,31960699）；;国家级大学生创新训练计划项目（202210410032）~~； |
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| 摘 要： | 【目的】研究旨在构建新冠病毒Omicron变异株（B.1.1.529）RBD重组质粒pET-28a-RBD-dimer，利用E.coli BL21(DE3)原核细胞表达S-RBD二聚体蛋白并制备其多克隆抗体，用于研究Omicron变异株RBD的免疫学功能。【方法】运用Golden Gate无缝克隆技术将密码子优化的RBD二聚体基因克隆到pET-28a载体中，构建pET-28a-RBD-dimer重组质粒。经表达条件优化后，以镍离子亲和层析法分离纯化RBD二聚体蛋白。将纯化的蛋白作为免疫原制备鼠源抗RBD二聚体蛋白的多克隆抗体，利用间接ELISA、IFA及Western blotting试验技术分别检测多克隆抗体的效价和特异性。【结果】ELISA试验结果显示该多克隆抗体的效价高达1:256 000,IFA及Western blotting试验结果表明该多克隆抗体可特异性识别原核、真核细胞表达的RBD二聚体蛋白以及商业化RBD蛋白，具有较好的特异性、反应原性和灵敏性。【结论】研究成功使用原核细胞表达Omicron RBD二聚体蛋白，其具有较好的免疫原性，可以有效制备具有较高抗体效价、特异性...
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| 关 键 词： | Omicron变异株 受体结合域 原核表达 多克隆抗体 |
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