芍药种子休眠解除过程的酵母杂交cDNA文库构建 |
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作者姓名: | 费日雯 樊富伟 孙天祎 辛如洁 宋文慧 关士鑫 孙晓梅 |
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作者单位: | 沈阳农业大学园艺学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学林学院,辽宁沈阳110866 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(32071814); |
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摘 要: | 【目的】芍药具有极佳的观赏价值,但其种子的双重休眠难以解除,严重阻碍芍药的育种进程。本研究利用gateway技术构建芍药种子休眠解除关键时期的酵母杂交cDNA文库,可用于筛选调控芍药种子休眠解除相关基因的转录因子及互作蛋白。本文库的构建可为丰富芍药种子休眠调控研究提供科学支撑,能为芍药栽培育种和野生资源保护及利用奠定分子理论基础。【方法】本研究以休眠解除过程中5个关键时期的芍药种子为试验材料,进行总RNA的提取和m RNA的分离,使用gateway方法构建cDNA初级文库,再通过LR重组,将初级文库重组到pGADT7-DEST次级文库载体上,构建出次级文库,最后经过酵母转化试验,将次级文库质粒转化到酵母Y187感受态细胞中,构建出芍药种子休眠解除过程的酵母文库。【结果】经鉴定,cDNA初级文库库容量为1.28×107 CFU,平均插入片段长度在1 000 bp以上,重组率为100%;cDNA次级文库库容量为1.12×107 CFU,平均插入片段长度在1 000 bp以上,重组率为100%;酵母文库滴度为7.0×107 CFU/mL,平均插入片段长度在1 000 bp以上,重组率为96%...
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关 键 词: | 芍药 种子休眠与萌发 酵母杂交 cDNA文库 gateway技术 |
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