| 理性设计和定点突变对提高海藻糖合酶TreSI热稳定性的影响 |
| |
| 引用本文： | 张丽霞,黄奕晴,吴嘉蕾,李元顺,王飞.理性设计和定点突变对提高海藻糖合酶TreSI热稳定性的影响[J].南京农业大学学报,2023(1):55-62. |
| |
| 作者姓名： | 张丽霞 黄奕晴 吴嘉蕾 李元顺 王飞 |
| |
| 作者单位： | 江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31560031)；;江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ160387)； |
| |
| 摘 要： | 目的]来源于黏细菌Myxococcus sp.V11的海藻糖合酶(trehalose synthase, EC 5.4.99.16)TreSI可通过转糖苷作用将麦芽糖转化成为海藻糖，在酶法生产海藻糖上有很高的应用前景，其热稳定性是制约该酶工业应用的关键。本文旨在通过定点突变对TreSI相关氨基酸残基进行改造，以期获得热稳定性强的突变子，提高其应用潜力。方法]使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对TreSI每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行初步预测，以SDM(site directed mutator)和mCSM(mutation cutoff scanning matrix)以及两者联合(Duet)进行预测。用重叠延伸PCR法构建11个海藻糖合酶突变体，经大肠杆菌表达和蛋白纯化后，对其酶学特性进行表征。结果]成功筛选到2个热稳定性提高的突变子。突变子R149L、N193E的比酶活与野生型无显著差异，且最适pH值和最适反应温度也未发生改变；R149L、N193E在50℃处理1 h的残余酶活性为野生型的1.37和2.50倍；在60℃处理1 h的残余酶活性为野生型的2...
|
| 关 键 词： | Myxococcus sp. V11 海藻糖合酶 定点突变 热稳定性 |
|
