小鼠RNA结合蛋白QKI-5的生物信息学和组织表达分析及其过表达对癌症相关基因表达的影响

【目的】旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5(Qki-5)的真核表达载体,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征,检测该基因的组织表达谱,并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响。【方法】提取小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区（Coding Sequence,CDS）全长,将获得的目的片段与线性化载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接以获得pcDNA3.1-m Qki-5。通过在线软件对Qki-5基因序列及其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Qki-5基因在小鼠不同组织中的表达谱,同时使用免疫组织化学技术检测QKI-5蛋白在小鼠肝脏组织的表达分布。之后,将pcDNA3.1-m Qki-5重组质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒分别转染至AML12细胞,通过qPCR和Western Blotting(WB)检测Qki-5基因在mRNA和蛋白水平的表达,并进一步检测Qki-5基因在AML12细胞中过表达后对癌...