山羊胰腺腺泡细胞体外分离、纯化、培养和鉴定

本试验旨在建立湘东黑山羊胰腺腺泡细胞的原代培养方法，为研究反刍动物胰腺外分泌功能提供细胞模型。试验利用胶原酶Ⅳ分离山羊胰腺腺泡细胞，开展了胶原Ⅳ的适宜浓度和消化时间、与0.25%胰蛋白酶消化效率对比、腺泡细胞纯化以及鉴定研究。结果表明：1）采用1.0 mg/mL胶原酶Ⅳ对湘东黑山羊胰腺组织消化20 min时，腺泡细胞分离效果最佳。应用此条件消化得到2.275×106个/mL总细胞数及91%的细胞活率。2）采用差时消化、差速贴壁及细胞刮取等方法纯化原代细胞，得到活性良好且形态均一成簇生长呈“鹅卵石”状的山羊胰腺腺泡细胞。3）纯化后腺泡细胞能够稳定传5代以上，且形态不发生改变。4）通过免疫荧光技术运用兔抗羧肽酶A1(CPA1)作为一抗对第1代和第5代山羊胰腺腺泡细胞进行鉴定，结果显示阳性。综上所述，本方法快速地分离了山羊胰腺腺泡细胞，并成功地纯化、鉴定和稳定培养了分离的山羊胰腺腺泡细胞。