猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用

为定量检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),建立了检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法。根据PEDV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果表明,该试验建立的荧光定量PCR方法在1μl 101~109拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上,扩增效率在90%与100%之间。该方法的检测灵敏度为10拷贝,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高,而且该检测方法特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应,批内和批间的变异系数均低于3%,表明该方法的重复性较好。对华东地区采集的130份临床样品进行检测,结果显示,PEDV的阳性率为63.1%。