Brazzein基因的合成及pGAPZαA-Bra表达载体的构建 |
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作者姓名: | 王长远 张丽萍 刘松财 汤丹 |
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作者单位: | 黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆,163319;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春,130062 |
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基金项目: | 黑龙江省自然基金项目 , 黑龙江省农垦总局科技攻关项目 |
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摘 要: | [目的]为Brazzein基因在酵母SMD1168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成Brazzein基因,将其连接到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-Bra。分别用XhoI和XbaI限制内切酶对克隆质粒pMD18-T-Bra和酵母表达载体pGAPZαA进行酶切,并在T4DNA连接酶作用下,将回收的目的基因连接到pGAPZαA载体上,构建重组质粒pGAPZαA-Bra。[结果]通过PCR扩增获得了约188 bp的Brazzein类似物的编码序列,将其克隆到pMD18-T质粒,用XhoI和XbaI双酶切后,连接到pGAPZαA载体,成功构建了重组表达载体pGAPZαA-Bra。Brazzein基因其中各碱基未发生突变,整个表达载体阅读框正确无误。[结论]利用基因工程的方法生产Brazzein是可行的。
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关 键 词: | Brazzein 克隆 pGAPZαA-Bra表达载体 |
文章编号: | 0517-6611(2008)15-06230-03 |
修稿时间: | 2008-03-26 |
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