鸡错配修复相关基因MLH1原核表达及抗体制备

为了更好地理解错配修复基因与禽类某些疾病的关系,研究制备了鸡错配修复重要标志性蛋白MLH1的多克隆抗体。首先克隆了鸡MLH1基因的部分保守序列,运用基因重组的方法构建了pET32a-MLH1原核表达载体,IPTG诱导后得到表达的重组蛋白,采用镍柱纯化法纯化重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,所得到的重组蛋白分子量与预测值一致,表明纯化得到了高纯度重组蛋白。以重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,3次免疫后制备抗血清。ELISA结果显示效价高于1∶20 000,Western blot显示抗体具有良好的特异性。本结果为检测鸡错配修复相关疾病发生中MLH1基因的功能研究提供了必要的抗体基础。