狂犬病病毒GX074野毒株M基因重组病毒的拯救与鉴定

为了探究狂犬病病毒M蛋白功能区域对其生物学特性的影响，本试验将狂犬病强毒GX074株和弱毒rRC-HL株的M基因进行比对，运用反向遗传技术以弱毒rRC-HL株为母本，将强毒GX074株的P基因和部分M基因替换至rRC-HL株相应位置，构建出重组病毒的全长感染性cDNA克隆，并成功拯救重组病毒；经过RT-PCR扩增测序检测、测定多步生长曲线。结果表明，拯救的重组病毒序列与预期一致，其生长趋势与亲本毒株rRC-HL相似，复制增殖能力高于亲本强毒株。在前24 h重组病毒滴度高于亲本毒株rRC-HL,48 h后由于重组病毒引起严重细胞病变死亡，病毒滴度上升幅度减缓。与强毒株GX074、CVS相比，重组病毒复制能力明显高于强毒株，且重组病毒可引起细胞病变，而强毒株不引起细胞病变。