草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型在不同鱼类细胞中的增殖情况 |
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引用本文: | 李贤,曾伟伟,王庆,王英英,李莹莹,宋新建,黄琦雯,石存斌,吴淑勤.草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型在不同鱼类细胞中的增殖情况[J].水产学报,2016,40(8):1249-1257. |
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作者姓名: | 李贤 曾伟伟 王庆 王英英 李莹莹 宋新建 黄琦雯 石存斌 吴淑勤 |
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作者单位: | 1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306;2. 中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380 |
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基金项目: | “十二五”国家科技支撑计划(2013BAD12B02);江西省科技计划项目(20152ACF60021) |
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摘 要: | 草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型(GCRVⅡ)是当前导致草鱼出血病流行和暴发的主要基因型,本研究拟通过分析GCRVⅡ代表株HZ08在不同鱼类细胞中的增殖情况来筛选GCRVⅡ的敏感细胞系。首先以不同浓度的HZ08株接种草鱼吻端成纤维细胞(PSF)和草鱼鳔细胞(GSB),以确定病毒接种的最佳浓度;然后以最佳接种浓度同时感染PSF、GSB、草鱼肝细胞(L8824)、草鱼卵巢细胞(CO)等10种鱼类细胞,接毒后每天观察细胞状态,用荧光定量PCR(q PCR)方法定量分析HZ08在各种细胞系中的增殖量,并在感染5 d后用间接免疫荧光定性分析病毒在各种细胞中的增殖情况。结果显示,HZ08感染细胞的最佳接种浓度为1.0×104拷贝/μL,该毒株接种的10种鱼类细胞均无明显的细胞病变效应(CPE);q PCR分析病毒感染5~8 d后的结果显示,HZ08在GSB、L8824、PSF、草鱼鳍条细胞(CF)、CO、草鱼脑细胞(CIB)、锦鲤吻端细胞(KS)7种细胞中均能增殖,其中在GSB、L8824和PSF细胞中的增殖量较大,最大分别为1.14×107、5.90×106和6.30×104拷贝/μL。而在鲤上皮细胞(EPC)、锦鲤脑细胞(KB)、鲫脑细胞(Cc B)中不增殖,免疫荧光定性检测结果与荧光定量检测结果相吻合,在GSB、L8824和PSF中的荧光信号较多、较强,其他细胞中则较弱或没有荧光信号。研究表明,GSB、L8824和PSF是GCRVⅡ较为敏感的细胞系,该研究结果对今后Ⅱ型GCRV的研究和防控产品开发具有重要意义。
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关 键 词: | 草鱼 呼肠孤病毒 基因Ⅱ型 细胞系 增殖情况 |
收稿时间: | 2016/1/21 0:00:00 |
修稿时间: | 5/9/2016 12:00:00 AM |
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