| 盐角草Cu/Zn-SOD基因的克隆及耐盐性分析 |
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| 引用本文： | 臧洁,余梅,王先磊,王荣富,李娟,吉虎,徐凯,鲁茂龙. 盐角草Cu/Zn-SOD基因的克隆及耐盐性分析[J]. 农业生物技术学报, 2013, 21(7): 847-854 |
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| 作者姓名： | 臧洁 余梅 王先磊 王荣富 李娟 吉虎 徐凯 鲁茂龙 |
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| 作者单位： | 1. 安徽农业大学生物技术中心,合肥,260036
2. 昆山科腾生物科技有限公司,昆山,215300 |
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| 基金项目： | 国家"十二五"科技支撑计划课题，安徽农业大学人才引进项目和昆山科腾生物科技有限公司基因工程项目 |
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| 摘 要： | 盐角草(Salicornia europaea)是一种典型的耐盐植物,为了研究盐角草Cu/Zn-SOD基因在的盐胁迫耐受中的机制,本研究利用已知植物Cu/Zn-SOD基因的保守序列设计简并引物,采用RACE技术的方法从盐角草中扩增获得Cu/Zn-SOD基因。使用生物学软件分析其氨基酸序列,并进行同源性比对。构建原核表达载体,转化大肠杆菌(Escherichiacoli),使目的蛋白在重组菌中表达,并分析了不同盐浓度并含有抗生素的液体LB培养基中菌的生长情况,IPTG诱导表达,通过测定OD600值来分析Cu/Zn-SOD基因的耐盐功能。结果通过简并引物PCR扩增和RACE技术,克隆出盐角草Cu/Zn-SOD基因。盐角草Cu/Zn-SOD基因(GenBank登录号:JQ074238.2)全长为660bp,开放阅读框长为459bp,推测编码152个氨基酸,蛋白分子量约为15.1kD,其氨基酸序列与碱蓬(Suaedasalsa)的序列相似性为96%,与黄灯笼辣椒(Capsicum chinense)的序列相似性为88%。生物学软件分析表明Cu/Zn-SOD蛋白可能存在于细胞质。构建原核表达载体pET-Cu/Zn-SOD和对照pETDuet-1,转化大肠杆菌BL21中。蛋白经IPTG诱导表达。经SDS-PAGE蛋白电泳检测发现表达蛋白条带大小与预期一致,说明目的蛋白成功表达。耐盐性分析表明重组菌BL21(pET-Cu/Zn-SOD)在高盐度培养基中的生长明显优于对照菌BL21(pETDuet-1),说明盐角草Cu/Zn-SOD基因可能在盐胁迫逆境中起到耐受性作用。
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| 关 键 词： | 盐角草 超氧化物歧化酶 基因克隆 耐盐性 |
Cloning and Salt-tolerance Analysis of the Salicornia europaea Gene Cu/Zn-SOD |
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| ZANG Jie,YU Mei,WANG Xian-Lei,WANG Rong-Fu,LI Juan,JI Hu,XU Kai,LU Mao-Long. Cloning and Salt-tolerance Analysis of the Salicornia europaea Gene Cu/Zn-SOD[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2013, 21(7): 847-854 |
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| Authors: | ZANG Jie YU Mei WANG Xian-Lei WANG Rong-Fu LI Juan JI Hu XU Kai LU Mao-Long |
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| Affiliation: | 1 Biotechnology Center, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; 2 Kunshan Keteng Bioscience and Technology Co., Ltd, Kunshan 215300, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Salicornia europaea Superoxide dismutase(SOD) Gene cloning Salt tolerance |
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