| 过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 郭润民,吴子君,黄瑞娜,王志强,姜佳美,刘畅,梁国标,陈科辉,李腾. 过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 湛江医学院学报, 2016, 0(5): 463-466. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2016.05.007 |
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| 作者姓名： | 郭润民 吴子君 黄瑞娜 王志强 姜佳美 刘畅 梁国标 陈科辉 李腾 |
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| 作者单位： | 1. 广东医科大学附属医院心血管内科,广东湛江524001;广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东湛江524001;2. 广东医科大学临床医学研究中心,广东湛江,524001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81670348)，广东省医学科学技术研究基金(A2016143)，广东省自然科学基金(2016A030313678、2015A030310359、2016A030310359)，湛江市科技计划项目(2014A01033、2015C01006)，广东医学院附属医院博士基金(BJ201511) |
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| 摘 要： | 目的 构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒.方法 应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定.用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGdeltaE11ox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度.用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达.结果 基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功.APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平.结论 成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体.
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| 关 键 词： | 脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 RNA干扰 AC16心肌细胞 |
Construction and identification of recombinant adenovirus overexpressing and downexpressing human APE1 gene |
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