通过重叠PCR构建2个增强型植物花特异双向启动子 |
| |
引用本文: | 张雄飞,刘雅莉,娄倩,祁银燕,杜灵娟.通过重叠PCR构建2个增强型植物花特异双向启动子[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2013(1):34-41. |
| |
作者姓名: | 张雄飞 刘雅莉 娄倩 祁银燕 杜灵娟 |
| |
作者单位: | 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室/农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室;西北农林科技大学林学院;西北农林科技大学园艺学院 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(30871734) |
| |
摘 要: | 基于植物基因工程要求精确调控的目标,为转基因提供更多可供选择的启动子,使用重叠延伸PCR的方法设计并人工构建了2个增强型植物花特异双向启动子pPCHS-35Senhancer-pLCHS和pPCHS-OCS enhancer-pLCHS。实验中,用本实验室保存的矮牵牛花特异启动子核心序列pPCHS、百合花特异启动子核心序列pLCHS、CaMV 35S增强子序列(35Senhancer)、OCS增强子序列(OCS enhancer)为模板,根据重叠延伸PCR原理,设计并合成了10条引物,进行两轮PCR,产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定,成功拼接出了与设计的双向启动子大小一致的2段序列。使用DAN回收试剂盒回收两段序列,克隆到pGEM-T Easy载体中并导入大肠埃希菌TOP10进行扩繁和保存,扩繁菌液进行测序分析,测序证实得到的两段序列与设计的双向启动子序列完全一致,成功获得2个增强型植物花特异双向启动子。本研究的结果能为今后利用多基因共转化的方法精确调控矮牵牛、百合等重要花卉的观赏性状提供有用的启动子。
|
关 键 词: | 启动子 增强子 重叠延伸PCR |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|