摘 要: | 用猪睾丸细胞增殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)国内分离株TH-98,根据基因库中已发表的TGEV S基因cDNA序列,利用Oligo软件设计并合成2对引物,进行逆转录聚合酶合酶链反应(RT-PCR),扩增出2.3kb和2.1kb2个片段,即Sa与Sb。将Sa与Sb先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRⅠ和PstⅠ多克隆位点上,构建了重组质粒pUC-S,根据TGEV S基因位点和pUC18的物理图谱,用相应的限制性内切酶进行酶进行酶切及套式PCR方法鉴定,分析,证明克隆的pUC-S为TGEV S基因,同时对pUC-S进行序列测定分析,并与来自美国,英国和日本的5个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较,证明了S基因的高度保守性。
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