犬细小病毒VP2基因的扩增、序列分析及其原核表达

为了制备犬细小病毒(CPV)VP2蛋白抗原,试验采用PCR方法,以一例疑似CPV感染的出血性肠炎患犬粪便为样品对VP2基因进行扩增,并将该目的基因克隆到p MD18-T质粒上,进行EcoRⅠ/HindⅢ双酶切鉴定及测序鉴定;对该基因进行序列分析后将VP2基因克隆到原核表达载体p ET-32a上,并转化E.coli BL21(DE3),诱导表达后进行Ni-NTA亲和层析纯化、Western-blot试验验证其生物活性。结果表明:克隆的基因全长为1 790 bp;该基因序列与已报道的CPV基因序列同源性高达99.2%~99.9%,氨基酸同源性达99.0%~99.8%,为新CPV-2a基因亚型,其中与泰国株GQ379042.1亲缘性最高,仅1个碱基不同,与猫细小病毒同源性高达98.69%;获得了87 ku的目的蛋白。说明该临床病例确为CPV感染。该株细小病毒VP2蛋白的成功表达可为吉林省CPV流行病学调查提供资料,可用于进一步的疫苗研究及免疫学方法的建立。