不同培养方法对鸡精原干细胞体外培养效果的影响

本研究从孵化至16 d的鸡胚睾丸中分离获取精原干细胞（Spermatogonial stem cells,SSCs）,比较3种培养液、2种处理（有无饲养层）对SSCs生长的影响,并对SSCs保持特性进行鉴定。结果表明：在无饲养层细胞存在的条件下,DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为6.5、6.0和3.5 d,DMEM和TCM199培养液之间差异不显著（P〉0.05）,但两者与RPMI1640之间均存在极显著差异（P〈0.01）。在有饲养层细胞存在的条件下,在DMEM、TCM199和RPMI1640培养液中,SSCs的存活时间分别为45.5、38.0和14.0 d,三者相互之间存在着极显著的差异（P〈0.01）。在6种培养体系中,SSCs在培养体系Ⅳ中的存活时间和AKP阳性克隆率分别为（45.5±3.20）d和0.31±0.46,极显著地高于其他5种培养体系（P〈0.01）。SSCs在培养体系Ⅳ中传代至1、2和3代时,AKP阳性克隆率分别为31.6%、20%和18%。SSCs形成的克隆,经AKP活性检测和SSEA-1免疫染色,均呈阳性。传代至第3代的SSCs,其染色体组型保持不变,为2n=78。这些结果表明,SSCs在以DMEM为基础培养基的培养体系Ⅳ中培养至第3代时,仍保持干细胞未分化特性。

Effect of Culture in vitro of Spermatogonial Stem Cells by Different Culture Systems in Chicken