海七鳃鳗CXCL8基因的原核表达及蛋白纯化 |
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引用本文: | 朱欣云,丁少青,张哲,任建峰,濮家飞,贾亮,李伟明,张庆华. 海七鳃鳗CXCL8基因的原核表达及蛋白纯化[J]. 海洋渔业, 2018, 0(1) |
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作者姓名: | 朱欣云 丁少青 张哲 任建峰 濮家飞 贾亮 李伟明 张庆华 |
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作者单位: | 上海海洋大学水产与生命学院;上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室;密歇根州立大学渔业与野生生物系; |
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摘 要: | 海七鳃鳗(Petromyzon marinus)是现存最古老的无颌类脊椎动物之一,对其重要免疫分子的研究在免疫系统的进化理论上有重要意义。细胞趋化因子CXCL8(又称白细胞介素-8,Interleukin 8)是最重要的趋化因子之一。为了研究海七鳃鳗CXCL8基因在天然免疫中的作用,以海七鳃鳗肝脏c DNA为模板,通过比对海七鳃鳗基因组信息设计引物,使用RT-PCR方法扩增得到PmCXCL8基因。随后构建原核表达载体pColdI-CXCL8,将载体转化至E.coli BL21和Rosetta(DE3)中进行表达,利用Bio-Rad IMAC蛋白质纯化试剂盒和Profinia蛋白质纯化系统进行纯化,纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,PmCXCL8开放阅读框(open reading frame,ORF)为309 bp,编码102个氨基酸,分子量为11.23 kDa,等电点为9.37。PmCXCL8氨基酸序列中保守的C36和C38之间插入一个氨基酸残基,为CXC型趋化因子,而且不含ELR(Glu-Leu-Arg)基序,相应位置被GGR(Gly-Gly-Arg)所替代。原核表达对比发现,该蛋白在E.coli Rosetta(DE3)中的表达优于E.coli BL21,最后通过亲和层析法纯化得到了高纯度的PmCXCL8重组蛋白。SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定结果均得到单一的条带,分子量约为11.23 k Da,符合预期结果,表明已成功表达出可溶性良好的PmCXCL8重组蛋白。该研究为PmCXCL8功能的探究与抗体的制备提供了实验材料,也为七鳃鳗天然免疫系统进化的研究奠定了基础。
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关 键 词: | 海七鳃鳗 细胞趋化因子CXCL8 原核表达 蛋白纯化 |
Prokaryotic expression and purification of CXCL8 from Petromyzon marinus |
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