| 运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱 |
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| 引用本文： | 史胜青,张守攻,李春秀,汪阳东,齐力旺.运用cDNA-AFLP技术初步鉴定两种方法合成的cDNA的指纹图谱[J].分子植物育种,2006,4(1):79-82. |
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| 作者姓名： | 史胜青 张守攻 李春秀 汪阳东 齐力旺 |
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| 作者单位： | 中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室,北京,100091;中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室,北京,100091;中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室,北京,100091;中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室,北京,100091;中国林业科学研究院林研所细胞生物学实验室,北京,100091 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划);国家转基因植物研究和产业化专项基金;国家科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 在植物基因克隆以及构建cDNA文库时,都需要合成高质量的双链cDNA,并要达到一定的数量。然而研究者经常受到试验样品量的限制。特别是比较稀少的植物材料,例如植物的根尖、茎尖或花的雌、雄蕊等,难以获得足够的RNA,以致影响cDNA的合成量,无法开展下游的实验。以PCR为基础合成第二链cD-NA的Smart技术(LD-PCR),能够以50ng的总RNA为反转录模板合成高质量的双链cDNA。但研究者对第二链采用PCR方法是否有些基因信息丢失或丰度上发生很大的变化存有疑虑。针对以上存在的问题,通过置换合成和长距离PCR(LD-PCR)两种方法合成3个月的梭梭幼苗茎尖双链cDNA,EcoRI和MseI限制性内切酶双酶切后,用16对选择性扩增引物对两种cDNA进行cDNA-AFLP的指纹图谱分析。结果表明,置换合成和LD-PCR两种方法合成的cDNA指纹图谱中,分别有条带约495条和470条。其中,相同的条带共计433条,不同的条带分别有62条和37条,分别为各自合成方法总指纹数的12.5%和7.87%,相同的指纹信息达87%以上。这说明两种方法合成的cDNA存在着较大的差异,合成方法对cDNA合成质量的影响较大,为研究人员选用何种cDNA合成方法提供了借鉴。
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| 关 键 词： | 梭梭(Haloxylon A mmodendron) 置换合成法 LD-PCR法 cDNA-AFLP |
Identification of cDNA Synthesized by Different Methods Using cDNA-AFLP Fingerprinting Technology |
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| Shi Shengqing,Zhang Shougong,Li Chunxu,Wang Yangdong,Qi Liwang.Identification of cDNA Synthesized by Different Methods Using cDNA-AFLP Fingerprinting Technology[J].Molecular Plant Breeding,2006,4(1):79-82. |
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| Authors: | Shi Shengqing Zhang Shougong Li Chunxu Wang Yangdong Qi Liwang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Haloxylon Ammodendron Replacement synthesis method LD-PCR cDNA-AFLP |
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