| 猪磷酸酪氨酸互作结构域1基因的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定 |
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| 引用本文： | 陈小玲,王欢,黄志清,周波,贾刚,刘光芒,赵华. 猪磷酸酪氨酸互作结构域1基因的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定[J]. 动物营养学报, 2014, 0(11): 3349-3355 |
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| 作者姓名： | 陈小玲 王欢 黄志清 周波 贾刚 刘光芒 赵华 |
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| 作者单位： | 四川农业大学动物营养研究所，动物抗病营养教育部重点实验室，成都 611130 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年科学基金项目(31201811)；四川农业大学双支团队项目 |
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| 摘 要： | 本文旨在通过原核表达获得猪磷酸酪氨酸互作结构域1(p PID1)重组蛋白,并制备p PID1多克隆抗体。将p PID1基因插入p ET28a(+),构建重组p ET28a(+)-p PID1大肠杆菌表达质粒,然后将重组质粒p ET28a(+)-p PID1转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中,获得的重组子以不同异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度、温度和时间诱导,确定p PID1融合蛋白表达的最适条件。将表达产物经镍离子-亚氨基二乙酸(Ni2+-IDA)亲和层析纯化后进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MSMS)鉴定。同时,将纯化获得的p PID1融合蛋白免疫SD大鼠,制备p PID1多克隆抗体,并检测抗体效价。结果表明:p PID1融合蛋白表达的最佳条件为30℃以0.1 mmol/L IPTG诱导4 h;纯化的融合蛋白经MALDI-TOF-MSMS鉴定为p PID1;特异性的p PID1多克隆抗体成功制备,抗体效价为1∶20 480。本试验成功制备了高纯度的重组p PID1及其多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 猪PID1 原核表达 纯化 质谱鉴定 多克隆抗体 |
Fusion Expression of Porcine Phosphotyrosine Interaction Domain Containing 1 Gene and Preparation,Characterization of Its Polyclonal Antibody |
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| CHEN Xiaoling,WANG Huan,HUANG Zhiqing,ZHOU Bo,JIA Gang,LIU Guangmang,ZHAO Hua. Fusion Expression of Porcine Phosphotyrosine Interaction Domain Containing 1 Gene and Preparation,Characterization of Its Polyclonal Antibody[J]. CHINESE JOURNAL OF ANIMAL NUTRITION, 2014, 0(11): 3349-3355 |
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| Authors: | CHEN Xiaoling WANG Huan HUANG Zhiqing ZHOU Bo JIA Gang LIU Guangmang ZHAO Hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine PID1 prokaryotic expression purification mass spectrum identification polyclonal anti-body |
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