| 体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT-PCR检测标准阳性模板 |
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| 引用本文： | 赵文姬,包静月,李林,王志亮.体外转录法制备小反刍兽疫病毒荧光定量RT-PCR检测标准阳性模板[J].中国动物检疫,2008,25(12):28-30. |
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| 作者姓名： | 赵文姬 包静月 李林 王志亮 |
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| 作者单位： | 1. 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009
2. 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032 |
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| 摘 要： | 针对小反刍兽疫病毒的F基因设计了一对荧光定量RT-PCR的引物和探针,在正向引物的5′端加上T7启动子后与反向引物扩增小反刍兽疫病毒株Nigeria 75/1细胞培养液RNA,切胶回收目的条带作为体外转录模板,体外转录后测RNA浓度以及OD值。线性试验和特异性试验结果表明,该模板具有良好的线性范围和特异性,当稀释度为4.9×108~4.9×103拷贝/μL时,相关系数为0.999。该模板稳定性好,-80℃保存一个月后无显著变化。对起始浓度为4.9×106、4.9×105、4.9×104拷贝/μl的标准品分别检测10次,变异系数分别为1.09%,1.47%,1.34%,表明以此模板进行荧光定量PCR具有较好的重复性。
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 体外转录 实时定量RT-PCR |
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