| 布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析 |
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| 引用本文： | 刘来珍,孙志华,刘娟,史静雪,陈创夫,张辉.布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI1069基因的原核表达与分析[J].现代畜牧兽医,2015(3). |
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| 作者姓名： | 刘来珍 孙志华 刘娟 史静雪 陈创夫 张辉 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆石河子,832003 |
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| 摘 要： | 为构建布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069基因的原核表达载体,进行分析,分析该蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量的影响,本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI1069基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,构建表达重组质粒pET-28a-BMEI1069.转染大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达,采用Western-Blot方法检测其免疫学特性,用纯化的重组蛋白感染细胞,并检测细胞因子含量.结果表明,获得了pET-28a-BMEI1069原核表达载体,在大肠杆菌中表达了BMEI1069蛋白,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是58 kDa,western blotting检测显示具有免疫特性,细胞加入BMEI1069重组蛋白后细胞因子IL-1、IL-10和TNF-α的表达均高于PBS对照组,差异显著(P＜0.05).本试验成功表达了布鲁氏菌分泌蛋白BMEI1069,证实其有一定的免疫特性,并且重组蛋白可以影响细胞因子的表达.这将为研究分泌蛋白在免疫逃逸和维持持续性感染的机制方面奠定基础.
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| 关 键 词： | 布鲁氏菌 BMEI1069 原核表达 细胞因子 胚胎滋养层细胞 |
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